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Die Anti-Terror-Einheit CTU wurde zerschlagen. Ex-Agent Jack Bauer (Kiefer Sutherland) muss sich vor einem Senatsausschuss für seine rücksichtslosen Verhörmethoden rechtfertigen. Da braucht FBI-Agentin Renee Walker (Annie Wersching) seine Unterstützung: Terroristen haben den Sicherheitsexperten Michael Latham entführt und planen einen Angriff auf die Infrastruktur der USA. Dahinter steckt ein alter Bekannter: Bauers totgeglaubter Freund Tony Almeida (Carlos Bernard).